TAMRA在熒光光譜的三個(gè)研究成果
1、堿基G對TAMRA的猝滅機理研究。堿基G能夠有效猝滅TAMRA,這種猝滅必須通過(guò)近距離接觸實(shí)現,機理是光誘導電子傳遞(PET)猝滅方式。G位于TAMRA的同鏈或是異鏈時(shí)體現的整體猝滅效果一致,但猝滅形式不同:同鏈G對TAMRA的PET作用效率更高;互補鏈的G占據分子結構優(yōu)勢,PET熒光組分比例更高。G個(gè)數越多PET作用越明顯,但沒(méi)有觀(guān)察到DNA鏈內各個(gè)堿基G之間的電荷傳遞作用。利用G能猝滅TAMRA熒光的性質(zhì)可以動(dòng)態(tài)監測雜交過(guò)程及定量衡量雜交程度,還可以得到一些特殊的結構信息,如發(fā)夾結構及分子鏈柔韌性等。
2、TAMRA作為能量受體與供體熒光素(FAM)形成供受體對定量檢測DNA分子結構的研究。FAM和TAMRA作為熒光共振能量轉移作用(FRET)的供受體對,F(o)rster距離為62.4(A)。12bp、15bp DNA單標記鏈的FRET實(shí)驗中,發(fā)現從熒光壽命均可觀(guān)察到較明顯的FRET現象,但是穩態(tài)光譜卻只能觀(guān)察到供體熒光的下降,而受體熒光無(wú)增強。此現象最終證實(shí)為增強的受體熒光被互補鏈的鳥(niǎo)嘌呤PET猝滅,故無(wú)法觀(guān)察到受體熒光。利用加入受體前后供體熒光壽命的變化計算得到12bp、15bp DNA單標記鏈、15bp DNA雙標記鏈的鏈長(cháng)分別為55.5(A)、60.8(A)、56.4(A),與DNA的B構型模型的結構信息基木相符。
3、TAMRA標記在DNA上的構型研究。通過(guò)穩態(tài)光譜和瞬態(tài)光譜對TAMRA化學(xué)鍵合在不同序列。DNA鏈的研究,對TAMRA-DNA復合物的三種不同熒光壽命組分予以歸屬:第一,短壽命組分為G對TAMRA的PET猝滅途徑的壽命組分;第二,中問(wèn)壽命值與自由TAMRA相近,為T(mén)AMRA較自由伸展在溶液中的狀態(tài);第三,長(cháng)壽命組分是TAMRA與DNA堿基形成的基態(tài)復合物的熒光組分。
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